02 背景    

二甲基亞砜（DMSO）常用于反相色譜的樣品溶解，因?yàn)樗苋芙獯蠖鄶?shù)化合物。DMSO 能夠溶解碳水化合物，但在 HILIC 中是一種弱溶劑，因此它允許樣品吸附在柱子上。在使用氨基柱時(shí)，DMSO 在 洗脫早期被洗脫；然而，在采用非氨基介質(zhì)的其他 HILIC 運(yùn)行中，它可能在梯度洗脫的后期才被洗脫。    

03 結(jié)果與討論    

雖然親水相互作用液相色譜（HILIC）屬于正相色譜，但它使用的溶劑通常適用于反相色譜，因此需要根據(jù)表 1 中的設(shè)置調(diào)整蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）的參數(shù)，以保持基線穩(wěn)定的同時(shí)維持靈敏度。    

表1. 純化碳水化合物的蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）設(shè)置。    

第一個(gè)實(shí)例使用了核糖和葡萄糖。亻貞查梯度和聚焦梯度都使用乙腈作為弱溶劑。亻貞查運(yùn)行只用了少量幾毫克，并且為了提高這個(gè)小樣品負(fù)載的靈敏度，ELSD 增益被調(diào)高到 3。第二個(gè)洗脫峰用于聚焦梯度；計(jì)算梯度后，ELSD 增益被重置為 1 以保持 ELSD 響應(yīng)在量程內(nèi)。本案例使用50克的RediSep Gold氨基管柱分離100毫克混和物。    

果糖和蔗糖通常一起出現(xiàn)在樣品中。圖 2 展示了從雜質(zhì)中純化果糖的過程。該混合物以與核糖-葡萄糖樣品類似的方式運(yùn)行，但改採(cǎi)行梯度聚焦于葡萄糖。在約 1.8 柱體積（CV）出現(xiàn)的峰是用于溶解樣品的 DMSO。    

圖1. 核糖和葡萄糖在 5.5 克 RediSep Gold Amine 柱上運(yùn)行亻貞查方法（上圖），并聚焦到 50 克 RediSep Gold 胺柱上。樣品總負(fù)載量為核糖和葡萄糖各 50 毫克。聚焦梯度中約 1.8 柱體積處的小峰是 DMSO。    

圖2. 使用 RediSep Gold Amine 柱和乙腈/水梯度從蔗糖中純化不純的果糖。

04 丙酮作為弱溶劑    

丙酮也是 HILIC 的弱溶劑，可以替代乙腈使用。盡管醇類可以用于 HILIC，但這些溶劑對(duì)于在胺柱上純化碳水化合物來說太強(qiáng)了。使用丙酮純化了一個(gè)果糖和葡萄糖的樣品。    

該混合物的純化方式與之前的例子相似，除了運(yùn)行亻貞查梯度時(shí)使用了一根 15.5 克的 RediSep Gold Amine 柱，因?yàn)?/span> PeakTrak 允許使用任何尺寸的 Teledyne ISCO 柱進(jìn)行亻貞查運(yùn)行。聚焦梯度使用了一根 50 克的 RediSep Gold Amine 柱，但計(jì)算出的梯度需要較低的水濃度來純化葡萄糖，這表明對(duì)于這些化合物，丙酮是比乙腈更強(qiáng)的溶劑。    

圖3. 使用丙酮/水梯度純化的果糖和蔗糖。亻貞查運(yùn)行使用了一根 15.5 克的 RediSep Gold 胺柱。    

05 結(jié)論